貨號(hào)：L6030-HC-L

品名：T4 DNA Ligase (Rapid)  （T4 DNA連接酶（快速））

產(chǎn)品描述：

T4 DNA連接酶催化雙鏈DNA或RNA的末端5'磷酸和3'羥基之間形成磷酸二酯鍵。該酶有效連接鈍端和粘端，并修復(fù)雙鏈DNA，RNA或DNA / RNA雜合體中的單鏈缺口（1）。

蛋白質(zhì)來(lái)源

攜帶克隆的T4 DNA連接酶基因的重組大腸桿菌菌株。

提供：

10 mM Tris-HCl
50 mM KCl
1 mM DTT
0.1 mM EDTA
50% glycerol
pH 7.5 @ 25°C

隨附：

B1010 (2X Rapid Ligation Buffer)
B6030 (10X T4 DNA Ligase Buffer)

2X Rapid Ligation Buffer (B1010):
132mM Tris-HCI
20 mM MgCl2
2 mM DTT
2 mM ATP
15% PEG 6000
pH 7.6 @ 25°C

10X T4 DNA Ligase Buffer (B6030):
500mM Tris-HCI
100 mM MgCl2
50 mM DTT
10 mM ATP
pH 7.6 @ 25°C

單位定義 
1單位定義為在23℃孵育30分鐘后，在50μl1X DNA連接酶緩沖液中加入100ng具有粘性末端的DNA片段的50％所需的DNA連接酶的量。

使用說(shuō)明：

1、反應(yīng)設(shè)置

2、過(guò)程操作

1）將所有上述組分加入干凈的反應(yīng)容器中，通過(guò)移液充分混合。

2）25°C孵育10分鐘。

3）使用PCR清潔柱立即純化DNA并洗脫約50μL。

4）- 或 - 在TE或水中立即稀釋?zhuān)ㄖ辽?:10，但足以使0.1-10ng連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化）

5）將0.1-10ng連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為與載體相容的化學(xué)或電子感受態(tài)細(xì)胞系

3、其他

在1X T4 DNA連接酶反應(yīng)緩沖液中用Lambda-Hind III DNA片段底物測(cè)量，一個(gè)酶酶T4 DNA連接酶粘性末端單位相當(dāng)于約3個(gè)粘性末端單位。

一個(gè)Weiss單位大約相當(dāng)于22個(gè)Enzymatics粘性末端單位。

T4 DNA連接酶是ATP依賴性的。建議在-20°C儲(chǔ)存一年后丟棄反應(yīng)緩沖液，并用新鮮緩沖液代替以確保*性能。當(dāng)靶向插入片段：載體比率在2和6之間時(shí)，單插入連接是*的。高于6：1的比率將促進(jìn)插入多個(gè)片段，而降至2：1以下將降低連接效率。

對(duì)于有問(wèn)題的連接或DNA濃度未知的情況，可能需要改變比率并進(jìn)行多次連接。

高濃度PEG的存在將顯著降低電感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。為了zui大限度地轉(zhuǎn)化為電感受態(tài)細(xì)胞，建議采用以下方法：

*： 連接后，使用DNA純化離心柱純化產(chǎn)物并在50μLTE中洗脫。DNA現(xiàn)在已準(zhǔn)備好轉(zhuǎn)化。要轉(zhuǎn)化的DNA的zui終數(shù)量應(yīng)該在0.1-10ng范圍內(nèi)。

更好： 在ddH2O或TE中稀釋連接產(chǎn)物以降低PEG濃度。要轉(zhuǎn)化的DNA的zui終數(shù)量應(yīng)該在0.1-10ng范圍內(nèi)。

Enzymatics的高濃度T4 DNA連接酶與2X快速連接緩沖液結(jié)合使用，極大地刺激了平端連接的速度和效率，因此不建議長(zhǎng)時(shí)間孵育（> 10分鐘），并可能大大降低連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化效率。為了使正確的插入/載體組合的轉(zhuǎn)化效率zui大化，推薦使用以下方案。

酶學(xué)10X T4 DNA連接酶緩沖液不含PEG，并且與標(biāo)準(zhǔn)連接方案相兼容，該方案不規(guī)定使用快速/快速/快速格式緩沖液。

部分產(chǎn)品信息：

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