
上海起發(fā)現(xiàn)貨omegabiotek D6943說明書
使用旋轉(zhuǎn)微型柱從1-5 mL細(xì)菌培養(yǎng)物中分離質(zhì)粒DNA
SKU: D6943
Category: Bacterial Plasmid
EZNA®Plasmid Mini Kit I旨在在30分鐘或更短的時(shí)間內(nèi)從1-5 mL細(xì)菌培養(yǎng)物中分離出多達(dá)30 µg的高質(zhì)量質(zhì)粒DNA。利用HiBind®Mini Column技術(shù)將質(zhì)粒DNA純化簡(jiǎn)化為三個(gè)快速步驟:結(jié)合,洗滌和洗脫。純化的質(zhì)粒DNA立即可用于多種下游應(yīng)用,例如常規(guī)篩選,限制性內(nèi)切酶消化和手動(dòng)/自動(dòng)熒光DNA測(cè)序。
EZNA®Plasmid Mini Kit備有2種不同類型的色譜柱:V型旋轉(zhuǎn)色譜柱有一個(gè)帶蓋(D6943),而Q型旋轉(zhuǎn)色譜柱沒有蓋(D6942)。在其他方面,這些列在使用和應(yīng)用上是相同的。兩種色譜柱均可用于真空或離心方案。
僅供研究使用。不用于診斷過程。
| 特征 | 技術(shù)指標(biāo) |
|---|---|
| 下游應(yīng)用 | 克隆; 危險(xiǎn)的排序,轉(zhuǎn)換等 |
| 起始原料 | 1-5 mL LB培養(yǎng) |
| 質(zhì)粒類型 | 高拷貝,低拷貝粘粒DNA |
| 處理方式 | 手動(dòng),離心或真空 |
| 通量 | 1-24 |
| DNA結(jié)合技術(shù) | 硅膠微型旋轉(zhuǎn)柱 |
| 裂解液清除方法 | 離心分離 |
| 處理時(shí)間 | <30分鐘 |
| 產(chǎn)量 | 15-25 µg(高拷貝數(shù));0.1-5 µg(低拷貝數(shù)) |
| 特別說明 | 終止酵母質(zhì)粒試劑盒的替代品 |
| 項(xiàng)目 |
|---|
| HiBind®DNA微型柱 |
| 2 mL收集管 |
| 解決方案一 |
| 解決方案二 |
| 解決方案三 |
| HBC緩沖液 |
| DNA洗滌緩沖液 |
| 核糖核酸酶A |
| 洗脫緩沖液 |
DNA濃度比較

圖1. 根據(jù)制造商推薦的方案進(jìn)行了用pGEM載體轉(zhuǎn)化的4 mLDH5α培養(yǎng)物。通過用NanoDrop®2000c進(jìn)行光密度測(cè)量來確定質(zhì)粒DNA濃度。總洗脫體積為50 µL。
超卷DNA

圖2. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案分離了用pGEM載體轉(zhuǎn)化的1 mLDH5α培養(yǎng)物。在1%瓊脂糖凝膠上分析5 µL洗脫質(zhì)粒DNA。
通過Nanodrop進(jìn)行DNA定量

表1. 用pGEM載體轉(zhuǎn)化的1 mLDH5α培養(yǎng)物。通過用NanoDrop®2000c進(jìn)行光密度測(cè)量來確定質(zhì)粒DNA濃度。總洗脫體積為50 µL。
桑格測(cè)序

表2. 用EZNA Plasmid Mini Kit I純化的質(zhì)粒DNA用于5 µL Sanger測(cè)序反應(yīng)。在Applied Biosystems 3730XL上分析DNA。
內(nèi)毒素水平

表3. 質(zhì)粒DNA制備物中的內(nèi)毒素。按照每個(gè)制造商推薦的方案,從0.8 mL LB培養(yǎng)物中分離質(zhì)粒DNA。內(nèi)毒素水平用Thermo Scientific的Pierce LAL生色內(nèi)毒素定量試劑盒測(cè)定。

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